분자 생물학의 방법론 - 시리즈 2편입니다.
개발자 Edwin Southern의 이름을 딴 Southern boltting은 DNA 본보기에 특정 절차가 존재하는지 아닌지를 구별하는 데 사용됩니다. 제한 효소 처리된 DNA 본보기는 젤 전기영동에 의해 분리된 후 모세관 현상에 의해 얇은 막으로 전달됩니다. DNA는 이동 막에 특정 서열로 상보적인 프로브를 뿌린다. 샘플 내에 특정 배열이 존재하는 경우, 씌우개는 프로브와 함께 표시됩니다. 씌우개에는 원래의 방사성 동위 원소가 사용되었지만, 이제는 몇 가지 대안이 개발되었습니다.
DNA 본보기에서 직접 서열을 분석하는 PCR과 같은 기술이 존재하기 때문에 Southern blotting 자체는 실험실에서 많이 사용되지 않습니다. 그러나 그것은 여전히 형질전환 쥐에서 형질전환 유전자 복제 수를 측정하거나 배아 줄기세포의 유전자 결함(노크 아웃) 연구에 사용된다. 서로 다른 RNA 샘플 사이의 특정 RNA의 발현 패턴을 비교하는 데 사용되는 기술은 Northern Brat입니다. 여기서 RNA는 크기에 따라 전기영동에 의해 분리되어 얇은 막으로 이동합니다. 나중에 남부 블록과 유사하게, 그들은 특정 절차의 존재와 양을 구별하면서 원하는 배열에 대한 보완적인 프로브를 만듭니다.
결과 밴드의 존재는 특정 절차가 존재한다는 이야기를 전달하고 밴드의 두께를 통해 RNA의 양을 추정할 수 있습니다. 북부 블랙은 특정 유전자가 살아있는 조직에서 언제 어떤 조건으로 표현되는지 아는 데 매우 유용하다. 서양의 얼룩은 특정 단백질의 존재 또는 양을 알기 위해 수행되는 분석 방법이며 주로 단백질의 발현을 식별하는 데 사용됩니다. 남쪽의 얼룩과 북쪽의 얼룩은 DNA-DNA와 DNA-RNA 사이의 특이성을 사용하는 반면, 서쪽의 얼룩은 단백질 사이의 특이성을 사용한다; 항원 항체(항원 항체) 반응이 주로 사용된다.
마이크로 어레이에서 DNA 마이크로 어레이는 슬라이드 유리판 위에 DNA 조각의 단일 가닥을 배치하는데, 이는 DNA 라이브러리라고 불리며, 그 그림이 도서관에 놓인 것과 유사하다. 어레이 기술을 사용하면 작은 슬라이드 유리 위에 그렇게 많은 작은 조각(지름 100마이크로미터)을 배치할 수 있었다. 어레이에 사용되는 각 섹션은 남부 브랫 원리와 유사한 특정 DNA 서열로 보완적으로 만들어졌습니다. 특정 서열의 존재는 어레이를 통해 확인할 수 있는데, 이 배열에서 상보 서열의 대상 DNA를 갖는 것으로 추정되는 조직의 RNA를 처리해야 한다.
첫째, 조직으로부터 RNA를 얻고 서열을 기반으로 cDNA(보완 DNA)를 만들어야 한다. 그 후 만들어진 cDNA가 어레이 상에 분산되면 상보적인 절차와 결합하여 전시한다. 같은 배열은 다중으로 생성될 수 있지만, 이것은 여러 개체 사이의 유전자 발현의 외관을 비교하기 위해 적용될 수 있습니다. 특히 암 조직과 정상 조직 간의 비교는 암 연구에 큰 도움이 되었습니다.
대립유전자 특이적 올리고뉴클레오티드(ASA)는 PCR이나 전기영동의 도움 없이 단일 염기서열 돌연변이를 발견할 수 있는 기술이다. 약 20 ~ 25개의 뉴클레오타이드로 구성된 단거리 특수 라벨 프로보다 절단되지 않은 DNA에 분산되면 혼합됩니다. 프로브의 매우 짧은 길이 때문에, 혼성화는 단일 염기 서열의 차이만으로 잘 수행되지 않는다; 이런 식으로 혼합되지 않은 DNA가 세척되고 남겨진 프로보다 제거된다. 복합화가 이루어지면, 실험자는 형광체와 방사성 원소로 덮인 프로보다 혼합되어 있음을 알 수 있습니다.
DNA 칩 또는 바이오 칩으로 알려진 DNA 마이크로 어레이 (영어 : DNA 마이크로 어레이)는 고체 표면에 통합되어있는 매우 작은 DNA 조각을 나타냅니다. DNA 칩은 트랜지스터 대신 유리판에 인간의 유전 정보를 가진 효소 일부를 부착하는 생화학적 반도체다. 실험 유전자가 DNA 칩과 결합하여 지도자에게 나타날 때 나타나는 반응을 분석하고, 질병의 원인을 비정상적인 유전자 등을 찾는 데 사용한다.
국립보건원은 5월 위암의 원인과 2000년 상반기 완공을 밝히기 위해 세계 최초의 DNA 칩을 개발했다. 과학자들은 대량의 유전자 발현 정도를 동시에 측정하거나 게놈의 여러 부분의 유전자형을 파악하기 위해 사용한다. 각각의 DNA 조각은 프로므(유전 표본)로 알려진 특정 DNA 연속체에 피코몰(몰)의 양을 포함하고 있다. 이들은 주로 유전자 또는 cDNA 및 CCNA 본보기를 고결한 조건에서 혼합형으로 만드는 데 사용되는 다른 DNA 요소의 짧은 부분입니다.
실시간 중합효소 연쇄반응 (영어: real-time polymerase chain reaction, real-time PCOS, quantum real-time polymerase chain reaction, qPCOS)은 분자생물학에서 종합효소 연쇄반응을 기반으로 한 실험방법이다.실시간 중합효소 연쇄반응은 동시에 증폭을 측정한다.